ADCC活性检测

抗体作为免疫系统的组成部分,在抵御疾病中发挥重要的作用。抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC),是抗体发挥作用的方式之一,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)。


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ADCC作用是抗体药物杀伤靶细胞的理想机制,通过ADCC试验可验证单克隆抗体的抗肿瘤活性。早期ADCC验证方法多为基于新鲜制备的外周血单核细胞或NK细胞做为效应细胞的杀伤试验,但这些方法存在细胞分类和培养困难、操作繁琐、背景值高、且受个体差异影响等缺陷。

爱康得生物致力于肿瘤抗体药物的研发,为解决传统ADCC试验中常见的问题,我们以荧光素酶报告基因检测系统为平台,构建了稳定转染CD16受体和NFAT(Nuclear Factor of Activated T-cells)反应原件的Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞系。当抗体的Fab段与靶细胞上抗原结合以后,抗体的Fc段与效应细胞Jurkat-NFAT-Luciferase-CD16细胞表面的(FcγRIIIA)结合,引起Jurkat-NFAT-Luciferase(New)-CD16细胞内NFAT相关信号通路活化,进而导致荧光素酶表达水平上升。该系统具有以下优势:

  • 数据结果稳定,检测过程快速;

  • 更高的灵敏度和优良的可重复性;

  • 可应用于悬浮或贴壁的各种靶细胞;

  • 可以用于质控治疗性抗体药物的效力和稳定性。


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图示说明:当抗体的Fab段与靶细胞上抗原结合以后,抗体的Fc段与效应细胞Jurkat-NFAT-Luciferase(New)-CD16细胞膜表面CD16(FcγRIIIA)结合,引起CD16(FcγRIIIA)胞内信号域发生活化,激活Syk蛋白,Syk蛋白的活化导致内质网内Ca+外流,从而使得细胞质内Ca2+浓度上升,Ca2+与Calmodulin(钙调蛋白)结合以后,可进一步向下游传递信号,使得处于抑制状态的磷酸化NFAT去磷酸化,解除抑制状态,NFAT转移至细胞核内,导致NAFT相关的启动子基因活化,启动Luciferase基因表达。通过检测不同抗体浓度下,Luciferase表达水平,可以评估相关抗体的ADCC活性。ADCC效应的强弱,与抗体抗原亲和力强弱,抗体的Fc段类型及抗体浓度等,密切相关。


案例展示: 

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  • 准备靶细胞并与待测抗体孵育

  • 准备效应细胞

  • ADCC活性检测

  • 周期1-2周


  • 抗体基本信息

  • 靶细胞


  • 项目报告


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