ABexpressTM-------基于单个B细胞测序的抗体发现平台

什么是ABexpressTM平台

单克隆抗体在现代生物学、医学及制药领域扮演了重要的角色,目前单克隆抗体制备技术有杂交瘤技术、噬菌体展示技术等。

然而各种抗体发现形式均存在一定的局限性,例如鼠杂交瘤单克隆抗体技术的基本过程是将来源于免疫接种过的小鼠的B 细胞与骨髓瘤细胞融合,继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的鼠杂交融合细胞,但是存在细胞融合成功率低、染色体丢失等不利因素。通过噬菌体展示技术,虽然可以摆脱 B 细胞融合过程、但是得到抗体可能发生构象改变继而丢失对抗原的亲和性,并且由于抗体重链和轻链随机组合,无法保持抗体重链轻链的天然配对。

 为快速高效的获得多样性的天然抗体,爱康得开发了ABexpressTM平台,这是一种基于流式分选、体外克隆和表达抗原特异性B细胞抗体基因的技术——通过不同的流式抗体和靶标抗原组合,分选出对靶标抗原具有亲合力的单个B细胞;通过PCR技术,克隆单个B细胞抗体编码基因并构建编表达载体,转染工具细胞株后,可验证细胞培养上清液中是否存在对靶标抗原具有亲和力的抗体。这种方法可避免杂交瘤和噬菌体技术带来的诸多不便,获得的抗体保留了轻重链可变区的天然配对,具有基因多样性好、效率高、周期短、适用于任意动物抗体筛选的特点。目前,我们已经利用这个平台,用于包括鼠单抗、兔单抗、全人源单抗和纳米抗体在内的多种抗体筛选。

single B.jpg

图示说明:基于ABexpressTM平台筛选抗体流程,本平台可省略细胞融合或噬菌体建库等技术流程

为什么选择ABexpressTM平台

这种方法保留了轻重链可变区的天然配对,具有基因多样性好、效率高、适用于任意动物抗体筛选的特点。可避免使用噬菌体库筛单克隆抗体过程中的假阳性,或非特异性结合等问题,可大大加速单克隆抗体筛选的速度,适用于大规模的单克隆抗体药物筛选。

ABexpressTM

杂交瘤技术

噬菌体技术

  • 覆盖免疫动物产生的所有靶标特异性抗体分泌细胞

  • 最短六周,一步获得准确的抗体基因编码序列

  • 平台可扩展至任意动物的单克隆抗体或纳米抗体

  • 高通量,一次可以获取到100+不同的候选抗体

 

  • 杂交瘤融合效率低,很多B细胞不能形成稳定融合株

  • 大量细胞培养,制备成本极高

  • 因为骨髓瘤细胞的限制,当前只能制备鼠单克隆抗体

  • 工作人员培训时间长,工作量大,通量低

  • 单抗制备流程长(8-10个月)

  • 杂交瘤细胞不稳定,容易导致抗体基因丢失

 

  • 噬菌体构建过程中,无法保证噬菌体库覆盖所有序列

  • 抗体展示过程中可能出现错误结构,抗体无法与靶抗原结合

  • 噬菌体与靶标的非特异性结合无法避免

  • 淘选工作量庞大,获得候选抗体数量少