基因敲除是通过一定的途径使机体内特定的基因发生突变或缺失的技术，通过观察基因缺失引起的表型变化，进而推测该基因的生物学功能。早期的基因敲除主要是利用DNA同源重组原理，通过设计同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。常见的基因敲除技术包括以下几种：

1、利用 RNA 干扰引起的基因敲除

      RNA 干扰( RNA in-terference，RNAi) 是 RNA 依赖的基因沉默现象，是双链 RNA( double stranded RNA，dsRNA) 分子在 mRNA 水平上诱发的序列特异性的转录后基因表达沉默。

2、锌指核酸酶基因打靶技术

      该技术是将特异性识别模块和功能模块融合，形成具有特定功能的蛋白，利用 ZFNS（锌指核酸酶） 人为造成特定基因位点的DNA 双链切口( Double strands breaks，DSB) ,再利用细胞固有的同源重组或非同源末端连接修复机制进行切口修复，从而实现高效率的基因定点修饰。

3、利用 TALEN 切割特定的核苷酸靶序列引起的基因敲除

       TALE 蛋白中的 DNA 结合域与 Fok I 核酸内切酶的切割域融合，在特异的位点打断目标基因，进而在该位点进行 DNA 操作，如敲入( Knock － in) 、敲出( Knock － out) 或点突变。
4、Cas9 基因敲除技术

      CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas）系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，对序列进行切割。其中最常用的是靶向DNA的CRISPR/Cas9系统，此系统是由II类CRISPR/Cas系统改造而来，能够在植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物等多种细胞中，进行有效的靶向编辑，具有操作简易、效率高、以及作用靶位点多等优势。

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