抗体偶联是指通过生化反应将标签直接连接到抗体上，通常涉及胺反应性或硫醇反应性化学。这些标签可以是酶（例如辣根过氧化物酶 (HRP)）、荧光染剂、生物素、纳米颗粒或核酸。

       抗体偶联，也叫抗体标记，是通过化学方法使抗体和一个特定的标记物结合的过程。因具有特异靶向性，抗体被广泛应用于抗原的检测和定量，常规实验有流式细胞术、ELISA、WB、IHC和免疫层析。我们把直接与抗原结合的抗体称为一抗。在很多实验中一抗还需要被偶联各种标记物，这是为了方便定量检测。这些标记物可以是酶、荧光染料、生物素等。

        一般偶联为两个分子通过各类连接子（linker）进行共价偶联，如下图：

      作为标记的偶联物种类虽多，但其实最常用偶联物只有3个大类，即：酶标记、荧光标记和生物素标记。   

      酶标记的毫无疑问是辣根过氧化物酶 (HRP) 。HRP能通过催化有过氧化氢参与的一系列氧化还原反应并释放信号，而被广泛应用于免疫印迹 (WB), 酶联免疫吸附 (ELISA), 以及免疫组织化学 (IHC) 等实验中。由于HRP自身稳定性强且催化效率高，因此可以通过很简单的操作，有效放大中低丰度靶标的信号，因此能够适应大多数检测情境。酶标记中的另外一种是碱性磷酸酶 (AP) 标记，常常是通过催化磷酸酯底物的去磷酸化显色反应而达到检测目的。与HRP相比，AP标记过程中酶活性损失更大、稳定性低且反应时间长，因此对制备和检测操作都提出了较高要求。但是得益于AP独特的最适pH和催化稳定性，这使得AP在碱性条件或对结果稳定性要求苛刻的特殊场合下，具有比HRP更好的工作性能。

       HRP标记往往是样本单靶点检测的先选，但当需要对同一样本中的多个靶点进行多通道检测时，荧光标记抗体则提供了一种更好的选择。各类荧光标记，如：AF系列、Cy系列、FITC、罗丹明等为研究人员们提供了极大地选择空间，因此被广泛应用于免疫荧光染色 (IF), 流式细胞术 (FC), 和荧光免疫印迹 (FWB)实验中。选择荧光标记时，荧光相对强度和光谱分离度的选择最为重要。由于激光光源、检测设备等的不同，不同的荧光标记在不同的设备上具有不同的荧光强度。因此，选择荧光标记物时，需要结合实验室设备的特点和蛋白丰度，以确保最亮的标记物和表达水平最低的蛋白相互组合。此外，“串光”问题会在荧光实验中带来非常大的不利影响，并直接影响结果的可信度。因此，荧光标记物发射光谱应尽可能地彼此远离，以避免邻近通道间荧光信号的串扰。如果难以确认最佳荧光标记的种类，优先去尝试AF488, Cy5, FITC, PE等文献中最常用到的荧光标记通常是较为稳妥的选择。

       和荧光与酶标记不同，生物素标记由于不能直接释放信号而很少被独立使用，但是却常出现在各类免疫学实验应用场景中。得益于生物素与各类亲和素高特异性且强力地结合，生物素标记抗体可以添加在原有的一抗和二抗之间（此时生物素化抗体成为二抗，而原先的二抗被三抗或标记的亲和素取代），随后被标记亲和素和生物素标记的结合，可以使低丰度靶标的信号被进一步放大，进而提升检测的信噪比。因此，当我们关心的靶蛋白丰度过低，以至于传统的标记物难以对其进行有效的检测时，生物素化抗体往往能力挽狂澜，成为我们实验成功的一根救命稻草。如果与时下流行的酪胺信号放大技术 (TSA) 相结合，生物素化抗体甚至能为我们提供清晰而明亮的荧光成像。

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